再向老師、師兄師姐學習經驗和技術，如果實驗平臺的儀器需要提前預約，建議提前規劃好使用的時間。反復總結尋找答案在整個預實驗的過程中可能會出現很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當、腹腔注射操作失誤、物使用不當等引起動物死亡。每遇到問題都需要自己想辦法解決，可以從導師、師兄師姐、文獻、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的物給藥，發現有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復嘗試調整濃度，給藥劑量，更換麻醉方式，后來才發現是動物體重秤的準度有問題，導致體重秤得不準。因此，需要自己反復琢磨到底是實驗過程中哪一個環節出現問題，逐一排除。也要求在每一個實驗步驟需要標準化，統一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時，建議每日總結，大到動物死亡原因分析，小到灌胃操作耗時多長時間。建議反復總結出每天實驗的優缺點。做任何一個操作之前，建議提前腦海中反復模擬，準備好相關工具和試劑，避免臨用之際缺少藥的，影響實驗操作節奏和個人心情。筆者曾經灌胃操作的時候發現藥物竟然忘帶了，只好重新回實驗室準備，那真叫一個郁悶。仔細記錄每日實驗過程無論是碩士還是博士。通過博來霉素誘導的肺炎樣癥狀及肺纖維化癥狀模型為研究ALL的有效措施提供理想的動物模型。西藏基因敲除動物模型構建

準備碎冰和。把膜置于甲醇溶液中活化1分鐘，然后轉移至轉膜液中平衡3分鐘后備用。2、轉膜組裝轉膜三明治夾，這一步很關鍵，重要的是膠和膜之間不能有氣泡且膜與膠要保證貼合緊密(否則會翻車)，可以加多點轉膜液泡著。組裝好后加滿轉膜液，設置電源參數，我習慣恒流轉膜，200-280毫安，1-2小時，根據分子量定，如50KD的分子用60分鐘就夠了。如果一個電源帶兩個轉膜大槽即四塊膠，我就會用恒壓70-110V。這個過程重要的是做好降溫。這里簡單說一下蛋白分子量與玻璃板厚度，分離膠的濃度，轉膜電源參數的選擇問題。如果是能用1毫米的玻璃板就不用，因為轉膜是在電場的作用下蛋白分子從膠上遷移到膜上，1毫米膠的蛋白遷移距離要比。選擇更薄的膠蛋白轉膜時間可以減少，從而減少發熱，以免膠變形，條帶也會更好看。然后是分離膠的濃度，如果是150—200KD的分子選10%以下的的分離膠，200—300KD的選8%的,300KD以上的選6%的，小于30KD的200mA30分鐘，30-100KD的按分子量的數值算，如70KD，250mA70分鐘;100-150KD的250mA100分鐘;150—300KD的分子轉膜條件用280毫安(以上均是對于，)，120分鐘足矣，前提是膠的濃度相適應。五、封閉孵一抗1、封閉轉膜結束后。湖南兔動物模型構建小鼠腎纖維化（UUO）模型建立。

中風模型）股動脈內皮損傷模型頸動脈結扎或部分結扎術深靜脈血栓模型下肢缺血模型門腔靜脈分流術左、右心血流動力學測試左心系統測壓右心系統測壓腹部手術膽管結扎術胃大部切除術小腸部分切除術急性腎衰模型單側腎切除術3/4腎切除術5/6腎切除術脾切除術腎上腺切除術腎上腺髓質摘除術骨關節炎模型脾神經切除術肝臟迷走神經切斷術胃迷走神經切斷術膈下迷走神經切斷術去勢術輸精管結扎術卵巢切除術單側或雙側輸卵管結扎術子宮切除術輸尿管結扎術神經系統手術單側腦內定位插管雙側腦內定位插管側腦室導管側腦室微量滲透泵導管第3腦室插管腓腸肌神經切除術軟組織手術甲狀腺切除術甲狀旁腺切除術甲狀腺切除術伴甲狀旁腺再植入術胸腺切除術松果體切除術垂體切除術傳感器植入手術血壓遙測左心室壓遙測門靜脈壓遙測血壓與心電圖遙測血壓與腦電圖遙測胸內壓遙測胸內壓與心電圖遙測心電圖遙測腦電圖遙測肌電遙測心電圖與腦電圖遙測腦電圖與肌電遙測血糖遙測體溫與活動度遙測血管導管手術頸動脈導管顱內給藥頸動脈導管腹主動脈導管股動脈導管股靜脈導管單側頸靜脈導管雙側頸靜脈導管門靜脈導管下腔靜脈導管非血管導管手術膽管導管胃導管十二指腸導管空腸導管回腸導管盲腸導管結腸導管膀。

動物的選擇目前常用的模式生物有果蠅、酵母、小鼠、斑馬魚等。目前主要是小鼠黑色素瘤模型。造模方法黑色素瘤小鼠模型可分為誘發性模型、移植性模型、轉基因模型。一、誘導性模型應用：誘導的小鼠模型模擬人類受外界因素影響獲得的黑色素瘤，常用于研究預防黑色素瘤形成。1紫外線誘導的小鼠模型通過紫外線照射獲得的黑色素瘤模型被認為是臨床上可靠的模型。方法：有研究者將HGF/SFcDNA表達的小鼠置于日光燈下用不同劑量(kJ/m2UVB、kJ/m2UVA、)進行紫外誘導15min。模型驗證：誘導后的小鼠出現皮膚發紅，偶有淺表皮脫屑，在組織病理學中觀察到小鼠產生的大多數皮膚黑色素瘤中具有真皮成分，病變顯示具有垂直生長期或浸潤性惡性黑色素瘤以及淋巴結轉移，這些病變與人類患者黑色素瘤頁面狀擴散的表皮內病變特征相似。缺點：但野生型或正常型小鼠一般不易發生UV誘導的黑色素瘤，因此UV誘導的黑色素瘤小鼠模型往往需要聯合免疫缺陷小鼠，其操作技術較難、成本較高。2化學誘導化學致物誘導黑色素瘤小鼠模型大多采用DMBA和TBA誘導。DMBA是一種免疫抑制多環芳烴，其致機理是其活性代謝物被CYP450代謝成致物1，2－環氧化物-3，4-二醇DMBA，進而損傷DNA。TPA是通過蛋白激酶C充當啟動子。小鼠CLP盲腸穿孔致膿毒血癥模型。

結果發現在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內發揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后，根據需要，裁剪適當大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉膜2h。(6)轉膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發光試劑盒檢測蛋白。缺血性腦血管病(ICVD)是威脅人類健康與生存的主要疾病之一。江蘇C57動物模型培養

長期攝入酒精致慢性酒精性肝病，建立酒精肝大鼠模型。西藏基因敲除動物模型構建

表明在gm20541敲除鼠視網膜外節變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4,6-diamidino-2-phenylindole)：細胞核染料4,6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實施方式為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例11采用rt-pcr方法檢測gm20541基因在不同組織的表達情況。方法：分別提取小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna，然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據gm20541的cdna序列設計引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3。以提取的cdna為模板，進行rt-pcr。擴增后進行電泳，結果見圖1。結果見圖1中a和b，可以看出，通過rt-pcr方法檢測gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達。西藏基因敲除動物模型構建