本發明涉及細胞分離培養技術領域，具體是涉及一體式原代細胞爬片培養瓶。背景技術：原代細胞是指從機體取出后立即培養的細胞。原代細胞培養一般指的是第1代到第10代以內的細胞培養。原代細胞用途，不僅應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，還可應用于當今熱門的生物醫藥產業等。原代細胞相較于細胞株(系)而言，有著不可替代的重要性。現有的原代細胞提取方法主要有消化分離法和組織塊貼壁法等。現行的組織塊貼壁法缺乏一個整體性和封閉性更出色的培養瓶。傳統的培養瓶(皿)進行原代細胞爬片培養有許多不便和不足之處。其一是為了保證組織塊的與培養瓶(皿)底部的充分接觸以及良好制動，需要使用細胞爬片，而細胞爬片需要購買無菌包裝或自行高壓滅菌，由于爬片和培養瓶一體性不好，有造成污染的可能性，再者爬片在用鑷子拾取的過程不易，容易碎裂等。其二是在放置爬片的過程中，難以控制爬片與培養瓶(皿)的接觸程度，即接觸面太小，培養基會滲進爬片與培養瓶(皿)之間，在浮力的作用下，爬片會漂浮，這樣就起不到爬片的作用，若爬片與培養瓶(皿)的間隙很小，就會影響培養基的滲入，對細胞的生長增殖不利。由于上述的局限性。胞形態：細胞貼壁生長，呈現鋪路石狀鑲嵌排列，細胞為扁平多角形。云南豚鼠原代細胞分離

凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。[4]細胞培養具體步驟編輯一、細胞復蘇將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10mlDMEM培養基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM完全培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。二、細胞傳代細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱3min。加人1mlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10mlPBS（經高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。三、細胞凍存細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含，放入細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內。寧夏C57原代細胞分離收到復蘇好的貼壁細胞的處理方法。

導語對于大部分科研人員來說，研究中一般用到均是現成的細胞系/株，我們只需要：進行細胞傳代和保種。然而，這些細胞系常常由于體外長期培養，而丟失原有生物學特性，對藥物處理的反應差距越來越大。因此，原代細胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細胞的數據都會添色不少。然而，就小編親生經歷，原代細胞分離著實是個技術活，我們就結合自身經驗，為大家介紹：組織和正常組織的原代細胞的分離與培養方法。部分：原代細胞的基本知識1.什么是原代細胞培養?原代細胞（Primarycells）：是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養的細胞。這里的組織主要指：組織、外周血及胚胎等。原代細胞培養：由于原代細胞生長緩慢，繁殖一定的代數停止生長（一般10代以內）。所以一般認為：培養的原代的第1和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。2.原代細胞與細胞系（celllines）的區別原代細胞和細胞系的比較：PrimarycellsCelllines增殖能力較弱強繁殖代數一般只能傳10代以內無限增殖，50代左右遺傳物質完整性遺傳物質未改變遺傳物質發生改變生物特性接近臨床樣本偏離臨床樣本培養容易程度比較復雜簡單。

使得每個內箱盒2都處于密封的狀態，防止外部污染因素的干擾。如圖5所示，，為方便使用者鎖緊或打開內箱盒2，所述鎖扣24包括鎖環241及鎖塊242，所述鎖環241與上蓋22活動連接，所述鎖塊242設于底盒21外部，所述鎖環241套設于鎖塊242上。當需要鎖緊內箱盒2時，只需將鎖環241活動轉動，然后套設在鎖塊242上即可，簡單方便。如圖1所示，進一步的，為方便使用者移動外箱體1，所述外箱體1的底部還設有若干萬向腳輪12。本實施例中，外箱體1的底部設有4個萬向腳輪12，各萬向腳輪12分別設于外箱體1底部的四個角上。如圖1所示，更進一步的，為方便推拉外移動外箱體1，所述外箱體1的側部還設有方便推拉的扶手13。使用者手持扶手13，利用萬向腳輪12移動外箱體1的位置，簡單方便。采用上述各個技術方案，本實用新型通過將細胞培養皿存放在內箱盒內，在外箱體的矩形槽設置若干層對稱的滑槽，各內箱盒可從滑槽的正面或背面存放于內，提高了細胞培養箱的空間利用率；在內箱盒內設有紫外燈，紫外燈單獨照射于內箱盒，使得細胞培養皿處于無菌無毒的環境，提高細胞培養的存活率；在內箱盒的兩側分別設有滑輪及滑塊，滑輪的設置使得用戶可方便存取內箱盒內的細胞培養皿。骨骼肌的一般形態特征肌細胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細胞膜下方。

具體實施方式以下結合附圖和具體實施例，對本實用新型進行詳細說明。如圖1至圖5所示，一種新型原代細胞培養箱，包括若干個用于存放細胞培養皿的內箱盒2、及用于存放所述內箱盒的外箱體1，所述外箱體1內設有若干列中空的矩形槽11，各所述矩形槽11的兩側分別設有若干層對稱的滑槽111，若干層所述滑槽111由上至下等間距依次設置，每一層所述滑槽111的正面及背面各存設有一內箱盒2，所述內箱盒2包括底盒21、紫外燈23及上蓋22，所述紫外燈23設于底盒21內，所述底盒21與上蓋22的一側通過合頁鉸接，所述底盒21與上蓋22的另一側通過鎖扣24扣合連接，所述底盒21上設有推拉把手25，所述底盒21的兩側分別設有與滑槽111適配的滑輪211，所述底盒21兩側的頭部分別設有與滑槽111適配的滑塊212。如圖1至圖3所示，內箱盒2內可存放細胞的培養皿，外箱體1的正面及背面均可存放內箱盒2，正背兩面可同時存放內箱盒2的設計，提高了細胞培養箱的空間利用率，使得細胞培養箱在同一占地面積的情況下可存儲更多的細胞培養皿。存放時，只需將內箱盒2的滑輪211對準滑槽111，手持在底盒21上的推拉把手25，通過滑輪211滑動的方式，將內箱盒2推送至滑槽111內。本公司分離的SD大鼠心肌細胞（乳鼠）取自新鮮的組織材料。湖南血液原代細胞實驗

血管平滑肌細胞的異常增加的生長潛力在血管疾病發生過程中起決定作用。云南豚鼠原代細胞分離

磷酸緩沖鹽溶液),注射器，灌流針，移液槍，培養皿，實驗動物，無菌水。二、組織塊制備選擇符合實驗動物倫理規范的方式處死動物，將動物浸泡在裝有70％醫用酒精的燒杯中數分鐘，用無菌剪暴露心臟，注射器吸取無菌pbs連接灌流針進行心臟灌流以去除循環中的血液，對所需的或組織進行取材，將組織移至無菌操作臺中，根據實驗需求用無菌鑷和無菌剪修剪出合適的大小，組織塊不宜過厚以免影響培養效果，可根據實驗需要選用膠原酶去除纖維組織。三、一體式原代細胞爬片瓶的使用根據實驗需求，可選用血清，明膠，多聚賴氨酸等基質預先包被培養瓶底部，以使細胞更好的貼壁生長。向加樣口6加入適當培養基，輕輕晃動培養瓶，使培養基覆蓋培養瓶底部一薄層即可。根據組織塊的大小，用移液槍或鑷子將組織塊通過加樣口均勻放置在培養瓶底部，根據實驗需求選擇合適的種植密度。注射器吸取適量無菌水然后向正壓口2中注入，在水的壓力下，通過聯動裝置即可推動纖維板8下移，待纖維板和組織塊達到合適的接觸程度時停止注水，繼續向加樣口加入適量的培養基浸沒組織塊，旋緊瓶蓋，動作輕柔的將培養瓶放進培養箱中。1-2天后鏡下觀察細胞生長狀態以及生長密度。云南豚鼠原代細胞分離