且研究表明HNRNPC通過m6A與RNA結合調控目標轉錄本的豐度和選擇性剪切[9].圖1m6A修飾的酶系統[10]m6A生物學功能越來越多的證據表明m6A修飾在哺乳動物中發揮重要的生物功能。例如，在轉錄水平上調控RNA的穩定性[11]、定位[12]、運輸、剪切[13]和翻譯[14]。ClaudioR.等發現依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會促進DGCR8識別和加工，從而促進microRNA的成熟[15]。此外，m6A識別蛋白HNRNPA2B1促進pri-miRNA加工成pre-miRNA[16]。另外，環狀RNA上m6A的修飾能促進環狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達調控中起著重要的作用，其調控機制的異常可能與人類疾病或相關。目前發現m6A可能會影響精子發育（ALKBH5，METTL3，Ythdc2）、發育（METTL3、FTO、ALKBH5）、免疫（METTL3）、UV誘導的DNA損傷反應（METTL3，FTO）、生成（YTHDF2）或轉移（METTL14）、干細胞更新（METTL14）、脂肪分化（FTO）、生物節律、細胞發育分化、細胞分裂及其它的一些生命過程。例如，ALKBH5敲除的雄性小鼠增加了mRNA中的m(6)A修飾，其特點是凋亡影響減數分裂中期的精子細胞，引起生育能力受損[7]。METTL3和METTL14增加弱精癥精子的m6A水平[18]，在生殖細胞中，METTL3的敲除嚴重抑制精子分化和減數分裂的發生。上海研錄生物醫藥為您提供一站式科研技術服務。貴州動物科研技術服務服務

常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實驗儀器是否需要預約使用。如果需要外送公司檢測，需要提前聯系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運輸。飼養動物及干預動物購買后需要將時間節點提前規劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預實驗方案就要提前設計清楚以上內容。取材及樣品準備取材需要提前到動物房禁食、稱體重、取出動物、手術的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當天需要多少人？是否需要請人幫忙？如果所需要取出的樣本較多，建議大家請人一起幫忙，流水線作業，這樣能節省時間，并且能保證樣品的質量。如果請人，每個人需要負責哪一板塊的工作，比如誰負責，誰負責取血液，誰負責取，誰負責拍照、誰負責儲存，都需要提前規劃交代清楚。實驗指標檢測如果是需要自己做的檢測，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎后，再向老師、師兄師姐學習經驗和技術。北京組織科研技術服務培養通過不同分組之間的細胞對于劃痕區修復能力的不同，可以判斷各組細胞的遷移與修復能力的差別。

把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形，這里的寬與長相對應)不大于8毫米，我習慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個小時，注意放置水平，用搖床。內參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現條帶連在一起的情況，這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個小時足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個槽地孵。2、顯影這一步有個細節可能有些同學沒注意到，就是ECL發光液要與HRP反應一分鐘后顯影效果才會更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。

m6A修飾圖譜構建及作用機制：通過m6A甲基化測序（MeRIP-Seq,miCLIP）構建疾病細胞模型或者發病組織的m6A修飾譜，分析m6A的motif,peaks數量及分布，Peak關聯基因的特征，聯合RNA-seq研究m6A甲基化與表達的關系。m6A研究思路方案一方案二研究案例1、.(IF=)為研究ALKBH5的m6A作用機制，作者利用芯片和m6A-seq篩選到膠質瘤增殖相關的FOXM1，通過qPCR、WB、免疫熒光、核質分離WB/qPCR、RIP和MeRIP等實驗證明ALKBH5通過去甲基化調節FOXM1在GSCs中的表達。為研究ALKBH5對FOXM1的作用是否受其他因子的調節，作者研究了FOXM1的鄰近基因，發現lncRNAFOXM1-AS與FOXM1序列互補，且共表達、共定位，進一步通過RIP,RNApulldown等實驗證明lncRNAFOXM1-AS促進ALKBH5和FOXM1初級轉錄本的相互作用。通過細胞實驗進一步驗證ALKBH5在lncRNAFOXM1-AS的作用下維持FOXM1的表達和細胞增殖，從而維持GSCs的干性。圖3ALKBH5敲除細胞中m6A修飾的特征和基因表達的變化2、RNAN6-methyladenosinemethyltransferaseMETTL3promoteslivercancerprogressionHepatology,2017.(IF=)表觀遺傳改變極大地促進了人類癥的發生。傳統的表觀遺傳研究主要集中在DNA甲基化，組蛋白修飾和染色質重構。近。干貨分享 | TUNEL法檢測細胞凋亡原理和經驗.

外泌體作為藥物載體由于特殊的結構和循環方式，外泌體作為藥物運輸的載體具有獨特的優勢。例如外泌體的尺寸分布能夠增強滲透滯留效應，從而有選擇性地深入組織;其外層磷脂雙分子層可以保護內容物不受各種生物酶的影響，維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中，其體積小，結構、組成與細胞膜類似，導致外泌體可以在避開免疫系統監督的同時深入組織內部，有較好的生物相容性;當采用內源外泌體時，能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應;除此之外，某些細胞來源或經特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性，可以與特定的或組織結合。因此，載藥成為外泌體研究的一個重要分支，具有良好的應用前景。在外泌體中引入藥物的方式包括體內裝載和體外裝載兩種。體內藥物裝載可以通過傳統方法(如病毒轉染、脂質體轉染或電穿孔等)轉染來源細胞，編碼感興趣的RNA或蛋白質，也可以使藥物與來源細胞共混，使細胞分泌產生含有目標生物分子的外泌體。體外藥物裝載則首先需要得到純化的外泌體，然后將感興趣的藥物通過電穿孔或脂質體轉染等方法裝入純化的外泌體。外泌體內可裝載的藥物包括小分子化學藥物、蛋白質和多肽、核酸藥物、天然產物等。干貨分享 | 瓊脂糖核酸電泳，選擇紫外還是藍光？貴州疾病科研技術服務技術

總的來說，動物疾病模型是一種重要的研究工具，可以幫助科學家們更好地了解疾病的發生機制和開發新方法.貴州動物科研技術服務服務

轉錄組和m6A分析顯示精子發生相關基因的表達和選擇性剪接發生了改變[19]。YTHDC2可促進靶基因的翻譯效率，并降低其mRNA的豐度，在精子發生過程中起關鍵作用。當減數分裂開始時YTHDC2表達上調，YTHDC2敲除小鼠的生殖細胞沒有經過偶線期的發育導致小鼠不育[20]。在DNA損傷反應中，METTL3可促進DNA聚合酶κ（Polκ）與核酸剪切修復途徑快速定位到UV引起的DNA損傷位點，當缺失METTL3時，細胞無法迅速修復UV照射引起的突變，并且對UV照射更加敏感[25]。在淋巴細胞性小鼠過繼轉移模型中，Mettl3缺陷通過影響mRNAm6A修飾，降低SOCS家族mRNA衰減，增加mRNA和蛋白表達水平，從而抑制IL-7介導的STAT5活性和T細胞內穩態增殖和分化，進而抑制腸炎的發生[21]。在肝中，METTL14通過調控pri-miRNA的m6A修飾，影響MiR-126的生成加工，從而抑制肝的轉移[22]。在乳腺細胞中，低氧刺激能促進依賴低氧誘導因子HIF的ALKBH5的表達，而ALKBH5過表達降低了NANOGmRNA的m6A修飾，從而穩定mRNA提高NANOG的表達水平，終增加乳腺干細胞所占的比例[23]。此外，低氧誘導乳腺細胞中依賴ZNF217的NANOG和KLF4的mRNAm6A甲基化抑制，且ALKBH5敲除降低免疫缺陷小鼠乳腺的肺轉移[24]。在肺中。貴州動物科研技術服務服務