特發性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉，6-8周齡，體重20~25g，仰臥固定于實驗臺上，頸部去毛后酒精消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管；2、將1mL注射器經兩氣管軟骨環間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力；3、注入博萊霉素（約4~5mg/kg）再向氣管內注入～3次，使藥物在肺部分布均勻；4、以大鼠身體長軸為中心，正反快速旋轉鼠板1～2分鐘。縫合皮膚，局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止，室溫保持在24～25℃，待動物自然清醒后置籠內常規飼養。肺纖維化模型發展時間：2周可見肺系數(肺重/體重×100％)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細胞浸潤，以淋巴細胞、單核吞噬細胞為主，并有肺泡壁增厚、成纖維細胞增生等Ⅱ級肺泡炎表現。4周可見肺間質內有大量散在綠染的膠原纖維，肺泡結構破壞，見有許多纖維細胞等Ⅲ級肺間質纖維化病變。大鼠模型病理組織學與病理生理學改變與人類肺間質纖維化相似。其病變早期表現為滲出性肺泡炎，炎癥細胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質纖維化，間質細胞增生，基質膠原聚集取代正常的肺組織結構。【檢測】組織病理切片HE染色。SD大鼠腦缺血模型建立。C57動物模型飼養

經多級乙醇至水洗：二甲苯(i)5min→二甲苯(ⅱ)5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸餾水洗2min；4)蘇木素染色5分鐘，自來水沖洗；5)鹽酸乙醇分化30秒；6)自來水浸泡15分鐘；7)置伊紅液2分鐘。8)常規脫水，透明，封片：95％乙醇(i)1min→95％乙醇(ⅱ)1min→100％乙醇(i)1min→100％乙醇(ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3：1)1min→二甲苯(i)1min→二甲苯(ⅱ)1min→中性樹脂封固。9)顯微鏡下拍照。結果發現在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，sixko小鼠的視網膜外核層已經開始變薄，表明感光細胞死亡(圖7)。實施例5視網膜冰凍切片免疫染色：取4月齡的由實施例2得到的gm20541基因敲除純合子小鼠斷頸處死后，快速取眼球，并放入4％的pfa中，冰上固定15min后，在角膜上剪口，然后繼續冰上固定。2h后，pbs緩沖液沖洗3遍，然后將眼球置于30％蔗糖溶液中脫水2h，然后解剖鏡下剪去角膜及晶體，oct包埋并迅速置于-80℃冰箱冷凍。大約10min后，取出oct包埋的眼球，置于冰凍切片機-25℃平衡約30min后即可切片。切片厚度為12μm。切片完成后，選取質量較高的片子于37℃烘箱放置30min，然后免疫組化筆在有視網膜組織的地方畫圈，pbs洗三遍以去除oct。湖南大鼠動物模型構建脂多糖（LPS）聯合煙熏法致慢性阻塞性肺部疾病小鼠模型。

40mmnaoh，)，并在金屬浴100℃加熱1h；(3)取出離心管，冷卻至室溫后，加入100μl的中和液(40mmtris-hcl，)，10000g離心2min后，取上清用于小鼠基因型鑒定。(3)pcr擴增：按照如系配置pcr反應體系2×taqmix：10μl尾巴組織裂解液：2μl引物1(gm20541-loxp-forward或six3-cre-forward)：1μl(濃度：10mm)引物2(gm20541-loxp-reverse或six3-cre-reverse)：1μl(濃度：10mm)ddh2o：6μl。引物序列如下：gm20541-loxp-forward序列：5’-attccccttcaagatagctac-3’；gm20541-loxp-reverse序列：5’-aatgatcaactgtaattcccc-3’；six3-cre-forward序列：5’-gccgccgggatcactctcg-3’；six3-cre-reverse序列：5’-ccagccgccgtcgcaactc-3’。擴增程序：pcr反應體系配制完后，在pcr儀上于95℃預加熱5分鐘使模板dna充分變性，然后進入擴增循環。在每一個循環中，先于95℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復性溫度58℃，保持30秒，使引物與模板充分退火；在72℃保持30秒，使引物在模板上延伸，合成dna，完成一個循環。重復這樣的循環25次，使擴增的dn段大量累積。，在72℃保持5分鐘，使產物延伸完整，4℃保存。(4)凝膠電泳稱取1g瓊脂糖放于100mltaebuffer中。

結果發現在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內發揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后，根據需要，裁剪適當大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉膜2h。(6)轉膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發光試劑盒檢測蛋白。動物模型的優越性主要表現在以下幾下方面。

動物疾病模型在科研中有著普遍的應用。首先，它們可以幫助科研人員深入理解疾病的共同性，即不同物種之間存在的共有病理變化過程。通過對動物模型的研究，科研人員可以更清楚地了解疾病的發展過程和機制，為人類疾病的檢查提供理論依據。其次，動物疾病模型還為新藥研發和疫苗測試提供了有效的平臺。在藥物研發過程中，科研人員可以通過對動物模型進行藥物處理，觀察其療效和副作用，為新藥的臨床試驗提供依據。而在疫苗測試中，動物模型則可以用來評估疫苗的有效性和安全性。此外，動物疾病模型還為科研人員提供了研究人類疾病的跨學科方法。例如，通過比較人類和動物模型的基因組學、蛋白質組學等數據，可以發現與疾病發生相關的關鍵基因和蛋白質，從而為疾病的預防和檢查提供新的思路。雖然動物疾病模型在科研中發揮了巨大的作用，但也存在一些挑戰。首先，由于物種差異的存在，動物模型的表現與人類疾病可能存在差異，因此需要謹慎使用。此外，動物模型的倫理問題也不容忽視，科研人員需要在符合倫理規定的前提下進行相關研究。盡管存在挑戰，動物疾病模型的發展前景仍然值得期待。隨著科技的不斷進步，科研人員將能夠開發出更為精確、實用的動物模型。面神經受損而致面部表情肌群的運動功能障礙,對患者的心理和日常生活造成很大的影響。湖南大鼠動物模型構建

因此，外科結扎膽總管并使膽總管完全阻塞已成為引起嚙齒動物梗阻性膽汁淤積性損傷的常用模型。C57動物模型飼養

其也是可以作為視網膜色素變性疾病模型的。以上所述為本發明的實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。sequencelisting四川省人民醫院利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用111406dna人工序列1gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttact60ggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcac120tgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagactattttcaaagttctagaag180acatggaaggcatgaaagaaatcatagtggagagaaaccttatgcttgtaaccaatgtga240taaagccttttcatgtcatcatagtctccaaatacataaaagaagacatactggagagaa300actctatgaatgtaaccgttgtaataaaggctttccatatcccagtgctctacaaataca360taaaaggatacacagtggagagaaaccctatgaatgtaaacaatgtggtaaagcctttgc420atgtcacagttctcttcaaaggcatgaaagaatacatactggtgagaaaccttatgaatg480tagccaatgtggtaaagcctttacacatcaaaagagtctccaaatacataaaagaactca540cagtggagaaaaaccatatgggtgtagtcagtgtggaaaagactttgtaagtcagagtcg600tcttctagaacataaaaggacacatactgga。C57動物模型飼養