應(yīng)根據(jù)所檢測指標的要求，需采取不同策略處理。在如今分子學當?shù)赖默F(xiàn)實背景下，動物實驗除了對實驗動物的體征及生理指標進行全的監(jiān)控外，各種分子檢測甚至是組學檢測也開始大行其道，動物實驗結(jié)束之后的機制研究成為了實驗的重頭戲。一般來說，動物實驗檢測對象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測由于此類檢測對象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時置于溫（≤-80℃）進行保存，在后續(xù)實驗過程中，也應(yīng)當注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免吸附測定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測方法的（比色法、比濁法等）方法對各類生化指標及因子進行定性及定量檢測。（2）生理變化及免組化檢測常用的理檢測多使用H&E染色對細胞質(zhì)及細胞核進行染色標記，以觀察細胞變化。除此之外，許多特殊染色也在理生理變化中得到了應(yīng)用，如利用Masson染色檢測纖維化變，Nissl染色檢測神經(jīng)元損傷，β-半乳糖甘酶染色檢測細胞衰老等。此外，還可以通過免組化技術(shù)對某些特異性標記物進行免顯色檢測，達到原位定性或定量檢測的目的。。建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。天津哪里有科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液，其中蘇木精堿性染液為藍色，可以將組織的酸性結(jié)構(gòu)染成藍紫色（細胞核呈現(xiàn)藍色；軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍；粘液呈灰藍）；伊紅是一種化學合成的酸性染料，在水中解離成帶負電荷的陰離子，易于蛋白質(zhì)氨基中的正電荷結(jié)合使細胞漿染色。細胞漿、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹膠石蠟包埋機、切片機、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤、顯微鏡溫度計、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（50mg/kg）進行麻醉，頸椎脫臼法處死小鼠，取出雙側(cè)卵巢。取下所需組織，切成一小塊3~4mm厚。2、固定、洗滌、脫水（1）將切好的卵巢組織用生理鹽水洗一下，使用中性福爾馬林固定液固定30~50min。后用流水沖洗3次，每次5min。（2）卵巢組織依次經(jīng)70%、80%、90%乙醇溶液脫水，各30min。（3）再放入95%、100%乙醇溶液各2次，每次20min。3、透明、透蠟（1）使用純酒精、二甲苯等量混合液處理組織15min。天津哪里有科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)科普知識 —了解IgM、IgG、IgA、IgE四種抗體。

制作該模型的方法為大鼠腹腔麻醉消毒后選取腹部正中切口打開腹腔長約2cm，尋找盲腸，小心分離其遠端與大腸的系膜，在盲腸遠端1/2處用無菌4號絲線緊緊結(jié)扎，并用無菌7號針頭在已結(jié)扎盲腸遠端處貫通穿刺，然后把盲腸推回腹腔，關(guān)閉腹腔。影響因素多數(shù)研究一致認為盲腸結(jié)扎位置是CLP模型中死亡率和疾病嚴重程度的主要決定因素。結(jié)論為：①結(jié)扎25%或以下的盲腸死亡率幾乎為零，為輕度膿毒癥；②結(jié)扎50%～60%的盲腸導致術(shù)后死亡率為60%，為中度膿毒癥；③結(jié)扎75%或以上的盲腸導致小鼠在術(shù)后2～3d內(nèi)全部死亡，為重度膿毒癥。而在不同程度膿毒癥中，死亡主要集中在初的48h內(nèi)。有研究通過改變盲腸結(jié)扎位置和穿刺針直徑來調(diào)節(jié)膿毒癥的嚴重程度，其中提到與結(jié)扎長度小于1cm的小鼠相比，結(jié)扎長度超過1cm的小鼠死亡率增加至100%；增加穿刺針的直徑也使得存活率從100%（22G針）降低至55%（19G針）。結(jié)論為：在上述兩個因素中，盲腸結(jié)扎位置比針頭大小影響更為。CLP誘導的膿毒癥術(shù)后6h即可出現(xiàn)菌血癥，術(shù)后約12h出現(xiàn)膿毒癥相關(guān)臨床癥狀，包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、毛發(fā)豎立、全身無力和活動減少等，術(shù)后18h開始死亡。總之，在制作CLP模型時。

膿毒癥動物模型必須具備以下基本要素：有膿毒癥典型的高排低阻血流動力學表現(xiàn)和高代謝狀態(tài)；伴發(fā)多個功能障礙；有較高的自然死亡率，根據(jù)膿毒癥的轉(zhuǎn)歸，要求動物模型的自然死亡率達到50%～70%；膿毒癥是嚴重引起機體的炎癥反應(yīng)過度造成的自身損傷，不是細菌和內(nèi)對機體的直接損傷，故出現(xiàn)功能障礙及動物死亡距膿毒癥模型制備應(yīng)有一定的時間間距。一般在制模后6～12h后發(fā)生的功能障礙或死亡屬全身炎癥反應(yīng)所致。實驗動物的選擇在制作動物模型時多選用雄性小鼠，因為雌性小鼠較雄性小鼠更能耐受膿毒癥和失血性休克，且進入發(fā)期的雌性小鼠性水平變化很大，而雄性小鼠在膿毒癥時更易于發(fā)生免疫抑制。為什么選擇CLP模型？盲腸結(jié)扎穿孔模型（CLP）模型是接近于人類膿毒癥機制的模型，被稱為膿毒癥模型的“金標準”。CLP技術(shù)在20世紀70年代被建立。CLP模型非常適宜用于防治膿毒癥或膿毒性休克新藥的臨床前觀察造模方法CLP膿毒癥模型的建立主要分為兩個階段：盲腸遠端結(jié)扎和盲腸穿刺。首先是手術(shù)引發(fā)的結(jié)扎部位組織變性壞死引起局部炎癥反應(yīng)，其次是穿孔后使糞便內(nèi)容物漏入腹膜引起多菌性細菌性腹膜炎，進而誘發(fā)全身性炎癥反應(yīng)。上海研錄生物醫(yī)藥為您提供一站式科研技術(shù)服務(wù)。

外泌體的功能外泌體可能作為細胞之間物質(zhì)和信號通訊的途徑，不同的細胞通過分泌攜帶不同組分的外泌體實現(xiàn)細胞間通訊，這些外泌體被受體細胞吸收，通過物質(zhì)交換或釋放內(nèi)含物實現(xiàn)物質(zhì)和信號的交流。外泌體與受體細胞的信息交流可能通過以下4種途徑實現(xiàn):外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細胞表面的受體識別，從而靶細胞;外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細胞表面受體的配體;外泌體脂膜可以與目的細胞膜融合，將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進去，此類膜融合可能改變靶細胞的一些膜特性，例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;目的細胞通過胞吞的形式攝入外泌體經(jīng)由以上幾種途徑，外泌體將其攜帶的生物信息運輸?shù)街苓叞屑毎蚪?jīng)血液等體液運輸而被遠處組織細胞攝取，進而影響目的細胞的基本功能和基因表達。幾乎所有的細胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過程，如發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。此外，外泌體與疾病的研究表明：外泌體可能在代謝性疾病的出現(xiàn)以及心血管健康中發(fā)揮作用。通過對動物模型的研究，科研人員可以更清楚地了解疾病的發(fā)展過程和機制，為人類疾病的檢查提供理論依據(jù)。黑龍江疾病模型科研技術(shù)服務(wù)購買

盡管存在挑戰(zhàn)，動物疾病模型的發(fā)展前景仍然值得期待。天津哪里有科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)

一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質(zhì)分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點不一樣，前者更容易與氧氣反應(yīng)，穩(wěn)定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準備首先強調(diào)一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優(yōu)先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉(zhuǎn)膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對齊，否則會漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分，加完SDS后先簡單手動搖勻幾下，然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習慣用95%的酒精壓膠，我也用過純水，感覺純水壓沒那么好，由于水的密度較大，會把分界處的膠壓得膨大。天津哪里有科研技術(shù)服務(wù)技術(shù)