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河北疾病模型科研技術服務培養

來源: 發布時間:2025-08-24

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METTL3能夠促進肺腺細胞的生長、生存和侵襲,但還不清楚它是否作為m6A調節器或效應器發揮作用[25]。在急性髓細胞白血病(AML)患者中,m(6)A調控基因的突變或拷貝數變化與TP53突變存在密切聯系,且m(6)A調控基因的改變與AML不良預相關[26]。此外,FTO在AML中高表達,它通過降低mRNA轉錄本中的m(6)水平,調節ASB2和RARA等靶點的表達,增強了白血病基因介導的細胞轉化和白血病形成,并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導的AML細胞分化[27]。在脂肪形成過程中,FTO表達與m6A水平成負相關,促進脂肪形成[3]。在膠質細胞瘤樣細胞中,ALKBH5通過lncRNAFOXM1介導FOXM1基因pre-mRNA上的m6A修飾維持膠質瘤細胞的成瘤性[28]。此外,甲基轉移酶METTL3或METTL14的敲除,能夠改變m6A的富集和ADAM19的表達,極大地促進了膠質瘤細胞的生長、自我更新和形成[29]。圖2m6ARNA修飾和介導的功能[30]m6A的研究方向主要是通過研究m6A修飾相關的甲基化、去甲基化酶和識別蛋白的功能,進而研究m6A修飾的生物學功能和作用機制:一般通過敲除m6A酶分子,研究下游功能基因分子的表達和m6A甲基化情況,通過介導相關基因異常(可變剪切、穩定性、翻譯、miRNA調控)影響細胞表型和功能特征。

實驗樣本分類實驗一般采取樣本有:血液樣本、樣本和細胞樣本。通常,樣本采集后,應立即用等滲溶液(PBS或生理鹽水)盡量把血液漂洗干凈(除非血液也是分析對象),用濾紙或紗布吸干,把樣本分切成幾分,每份的體積約2個黃豆大小,每份用一個管子裝。血液樣本的采集應根據不同實驗的要求,將會采取不同策略。血清樣本:全血中不加抗凝劑,血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黃色透明液體。(全血標本室溫放置2小時3000rpm/min離心15min)血漿樣本:全血中加抗凝劑,血液凝固后取出的含凝血因子的淡黃色透明液體。(可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2-8℃,3000rpm/min離心15min)如果是做生化\ELISA等檢測可以考慮血漿和血清,根據獲得的樣本量可考慮分裝成100-500μl/管,可避免反復凍融造成的檢測誤差。生化:建議優先選擇血清,其次選擇肝素抗凝血漿;ELISA:建議優先選擇血清,其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿;凝血實驗:只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿;血常規:只能選擇EDTA抗凝全血;如果要收集其中的白細胞、血小板等建議用抗凝全血。如果要做流式建議用專門的流式用血液收集管,防止表面抗原的丟失,或者盡快安排就近檢測。樣本處理取樣完后。這項技術可用來將含有上千種不同蛋白質的樣品中,分離和濃縮出特定蛋白質。

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RNA各種可逆的化學修飾被認為是一種新的表觀遺傳調控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學修飾,在調控mRNA穩定性,剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉錄組測序發現了METTL3(甲基轉移酶3),一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉移酶,在人肝細胞(HCC)和多種實體中高表達。在臨床上,METTL3的過度表達與肝細胞患者不良預有關。體外實驗證明敲除METTL3會抑制HCC細胞增殖,遷移及克隆形成。體內實驗證明敲除METTL3會明顯抑制HCC體內成瘤和肺轉移。另外,使用CRISPR/dCas9-VP64系統,內源性高表達METTL3會促進HCC細胞在體外和體內生長。通過轉錄組測序、m6A-Seq、MeRIP-PCR,作者確定了SOCS2(細胞因子信號2的抑制因子)作為METTL3介導的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達會消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強SOCS2mRNA表達。m6A介導的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2。總之,METTL3在HCC大部分高表達中,并通過m6A-YTHDF2依賴機制抑制SOCS2表達從而促進HCC進展。因此,作者發現了在肝發生過程中表觀遺傳改變的一種新機制。圖4RNA甲基化轉移酶METLLT3在肝組織中高表達。細胞生物學是生物學的一個分支,研究細胞的結構、功能、生理和遺傳學等方面。江蘇兔科研技術服務培養

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這種細胞保持著其原始的生物學特性,具有高度的活性和分裂能力。原代細胞在許多生物醫學研究中具有重要地位,包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發等。原代細胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細胞脫離了它們在生物體中的環境,但是仍然保持著其基本的生物學特性,包括細胞膜、細胞核、細胞器以及其他重要的生物分子。原代細胞在未經過傳代培養的情況下,保持著其原始的生物學特性,因此,它們常常被用于藥物篩選、毒理學研究等。同時,由于原代細胞具有高度活性和分裂能力,它們也被用于組織工程和再生醫學中,如皮膚移植、骨頭修復和神經再生等。此外,原代細胞模型在疾病研究中也扮演著重要角色。由于原代細胞具有更高的生物真實性,使用它們建立的疾病模型能夠更準確地模擬疾病的發展過程和藥物的作用機制,從而為新藥研發和疾病治、療提供更有效的工具。總之,原代細胞是一種具有高度活性和分裂能力的細胞,在生物醫學研究中具有重要的作用。由于其原始的生物學特性。河北疾病模型科研技術服務培養

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