結果發現在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內發揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后，根據需要，裁剪適當大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉膜2h。(6)轉膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發光試劑盒檢測蛋白。惡性黑色素瘤是起源于神經嵴的黑色素細胞惡性。云南動物模型培養

本發明實施例提供了由上述的方法所得到的視網膜色素變性疾病模型在視網膜色素變性性疾病研究中的應用。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述研究是以非疾病的為目的。通過本發明的構建方法得到的動物模型其具有典型視網膜色素變性性疾病特征，其具有非常廣闊的應用前景，例如將其用于研究視網膜色素變性性疾病的發病過程、發病機制，為深入了解研究視網膜色素變性性疾病提供基礎。又或者將其用于篩選用于預防或視網膜色素變性性疾病藥物、用于評價藥物的療效或預后等。第三方面，本發明實施例提供了由上述的方法所得到的視網膜色素變性疾病模型在篩選用于預防或視網膜色素變性性疾病藥物中的應用。在本發明方面提供了構建方法的基礎上，本領域技術人員容易想到將由該方法得到的視網膜色素變性疾病模型用于篩選預防或視網膜色素變性性疾病藥物或其他類似領域，這也是屬于本發明的保護范圍。進一步地，在本發明的一些實施方案中，所述應用包括：向所述視網膜色素變性疾病模型施用候選藥物，如果所述視網膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發生如下變化中的至少一種，則指示所述候選藥物可以作為預防或視網膜色素變性性疾病的藥物：(1)施用所述候選藥物后。西藏基因敲除動物模型造模避免了在人身上進行實驗所帶來的風險。

40mmnaoh，)，并在金屬浴100℃加熱1h；(3)取出離心管，冷卻至室溫后，加入100μl的中和液(40mmtris-hcl，)，10000g離心2min后，取上清用于小鼠基因型鑒定。(3)pcr擴增：按照如系配置pcr反應體系2×taqmix：10μl尾巴組織裂解液：2μl引物1(gm20541-loxp-forward或six3-cre-forward)：1μl(濃度：10mm)引物2(gm20541-loxp-reverse或six3-cre-reverse)：1μl(濃度：10mm)ddh2o：6μl。引物序列如下：gm20541-loxp-forward序列：5’-attccccttcaagatagctac-3’；gm20541-loxp-reverse序列：5’-aatgatcaactgtaattcccc-3’；six3-cre-forward序列：5’-gccgccgggatcactctcg-3’；six3-cre-reverse序列：5’-ccagccgccgtcgcaactc-3’。擴增程序：pcr反應體系配制完后，在pcr儀上于95℃預加熱5分鐘使模板dna充分變性，然后進入擴增循環。在每一個循環中，先于95℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復性溫度58℃，保持30秒，使引物與模板充分退火；在72℃保持30秒，使引物在模板上延伸，合成dna，完成一個循環。重復這樣的循環25次，使擴增的dn段大量累積。，在72℃保持5分鐘，使產物延伸完整，4℃保存。(4)凝膠電泳稱取1g瓊脂糖放于100mltaebuffer中。

一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點不一樣，前者更容易與氧氣反應，穩定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準備首先強調一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環節也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優先選1毫米，否則選。原因是什么?答案在轉膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈，晾干。裝板，注意厚板和薄板的底部要對齊，否則會漏膠。加制膠的各成分前，要觀察液體是否有沉淀，有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分，加完SDS后先簡單手動搖勻幾下，然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻，緊接著就灌膠。然后我習慣用95%的酒精壓膠，我也用過純水，感覺純水壓沒那么好，由于水的密度較大，會把分界處的膠壓得膨大。采用復合改良法造模,是目前 IgA 腎病中較為可靠、穩定、成功率高,且病理、臨床指標近人類 IgA 腎病的動物模型。

相較于施用所述候選藥物前，所述視網膜色素變性疾病模型的視力提高；(2)施用所述候選藥物后，相較于施用所述候選藥物前，所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外核層變厚；(3)施用所述候選藥物后，相較于施用所述候選藥物前，所述視網膜色素變性疾病模型的視網膜外節增長。第四方面，本發明實施例提供了一種視網膜色素變性疾病模型的繁育方法，其包括：將由如上所述的方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交。在由方面所述的構建方法得到了視網膜色素變性疾病模型的基礎上，為了獲得更多的視網膜色素變性疾病模型，本領域技術人員容易想到直接將上述的構建方法得到的視網膜色素變性疾病模型進行自交以繁育或培育出更多數量的視網膜色素變性疾病模型，這也是屬于本發明的保護范圍。附圖說明為了更楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。圖1：檢測gm20541基因在不同組織中的表達；圖中：a：rt-pcr檢測gm20541基因在不同組織的表達結果。卵巢早衰（POF）是多種病因所致的卵巢功能衰竭。上海大鼠動物模型培養

慢性阻塞性肺疾病是一種具有氣流阻塞特征的慢性和（或）肺氣腫。云南動物模型培養

技術實現要素：本發明的目的在于提供利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用，采用該構建方法可以得到視網膜色素變性疾病模型，該模型可表現出視網膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發病過程及機制，并為該疾病的或預防提供新的靶標。本發明是這樣實現的：方面，本發明實施例提供了一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標動物視網膜前體細胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子，對基因調控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔進入核內，作為轉錄因子調控其他基因的表達。目前針對znf124蛋白功能的研究報道并不多，對其功能也知之甚少，znf124與一種先天性系統發育疾病dandy-walker復合征(dandy-walkercomplex，dwc)相關。此外，znf124被認為參與了前體生長因子(vegf)對人造血細胞凋亡的抑制作用，表明znf124在人體生命活動中承擔有重要功能。發明人的另一研究表明，znf124基因突變與rp有關，對探索rp的致病機制有極大幫助。因此，深入研究znf124對視網膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。云南動物模型培養