痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型【簡介】痙攣性腦癱指發育異常引起的運動和感覺功能落后，造成肢體肌張力增高、腱反射亢進等一系列綜合征。本實驗利用腦立體定位解剖圖譜,對大鼠的錐體束部位進行精確的立體定位,通過微量注射器對大腦錐體束所在部位注射無水乙醇造成錐體束壞死,的模擬了痙攣型腦癱的解剖學及病理改變,術后大鼠產生明顯的屈曲痙攣癥狀,且屈肌肌張力增高,癥狀和體持續時間較長,穩定性良好。從而建立一種可復制性良好且痙攣持續時間較長的穩定的大鼠痙攣型腦癱動物模型,為進一步深入的探究痙攣型腦癱的基礎研究和臨床診治打下基礎【目的】痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型建立【動物】SPF級SD大鼠，雄性，周齡6~8W，體重：200~250g【方法】1、大鼠麻醉，顱頂脫毛備皮；2、大鼠腦定位儀固定大鼠，顱頂正中切口，長度約2cm開口暴露前囟及矢狀縫；3、縫線將皮膚左右分開固定，前囟后10mm、矢狀縫左側；4、微量注射器移至開孔處修正骨孔，注射器垂直向顱內插入，緩慢注射無水乙醇15ul，注射完移除注射器，棉球壓迫止血；5、縫合創口后維持25°體溫，等待蘇醒，觀察大鼠狀態。【觀察】術后3天模型大鼠攝食減少、右側肢體跛行、右前肢不負重、右前肢及右前爪屈曲痙攣明顯。干貨分享 | 瓊脂糖核酸電泳，選擇紫外還是藍光？廣西模式科研技術服務購買

用途基因功能研究、免/殺傷/增殖等、抗體活性篩選（細胞水平的結合和阻斷）、CAR分子的殺傷活性評價。材料與儀器（以慢pMSCV載體為例）包含目的基因和eGFP-Tag的pMSCV質粒、帶有eGFP-Tag的pMSCV空載質粒、GAG質粒、VSV質粒、Puromycin、Polybrene、Lipo3000、HEK293T細胞、opti-MEM、DMEM、FBS、雙抗、μm的濾膜、熒光顯微鏡等。步驟1、基因的構建1)根據目的基因mRNA編碼區設計引物，分別在引物兩端加入酶切位點EcoRI和BglII。2)從細胞中提取目的基因mRNA，然后逆轉錄成cDNA，然后從cDNA里面用引物把目的基因的CDS區擴增出來。PCR擴增出帶有酶切位點的目的基因編碼區序列，連接至pMD19-T載體后轉化至感受態DH5α，分別進行菌落PCR鑒定和酶切鑒定。3)使用EcoRI和BglII雙酶切下目的基因序列，電泳割膠回收純化，連接到pMSCV-eGFP載體。再次轉化到感受態DH5α，菌落PCR鑒定和酶切鑒定成功后，送至公司測序、鑒定。4)鑒定成功后，將質粒轉化至感受態DH5α中，并進行無內質粒抽提。GAG質粒和VSV質粒同樣可以轉化至感受態DH5α中，并進行無內質粒抽提。質粒抽提后冷凍于-20℃保存。2、慢包裝1)使用DMEM完全培養基培養6cm皿HEK293T至匯合度為70~80%。浙江小鼠科研技術服務實驗可以穩定的WB精髓與經驗分享。

RNA各種可逆的化學修飾被認為是一種新的表觀遺傳調控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學修飾，在調控mRNA穩定性，剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉錄組測序發現了METTL3（甲基轉移酶3），一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉移酶，在人肝細胞（HCC）和多種實體中高表達。在臨床上，METTL3的過度表達與肝細胞患者不良預有關。體外實驗證明敲除METTL3會抑制HCC細胞增殖，遷移及克隆形成。體內實驗證明敲除METTL3會明顯抑制HCC體內成瘤和肺轉移。另外，使用CRISPR/dCas9-VP64系統，內源性高表達METTL3會促進HCC細胞在體外和體內生長。通過轉錄組測序、m6A-Seq、MeRIP-PCR，作者確定了SOCS2（細胞因子信號2的抑制因子）作為METTL3介導的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達會消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強SOCS2mRNA表達。m6A介導的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2。總之，METTL3在HCC大部分高表達中,并通過m6A-YTHDF2依賴機制抑制SOCS2表達從而促進HCC進展。因此，作者發現了在肝發生過程中表觀遺傳改變的一種新機制。圖4RNA甲基化轉移酶METLLT3在肝組織中高表達。

小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴張；用無菌手術刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截斷小鼠尾尖1-2毫米。如果需要多次，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結束后，按壓傷口或使用止血劑來止血；每次量大約可達。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘取；同時用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當血液流盡時，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進行麻醉，大鼠翻正反射消失時不在繼續麻醉；抗凝處理過的玻璃毛細采樣管，掰成2-3厘米長度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側皮膚，使眼球突出，毛細管從內側的眼球與眼瞼的縫隙處進入，輕輕旋轉毛細管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時候4-5滴即可，溫柔的將毛細管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側平躺在手術板上固定；左側第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動明顯，慢慢進針；針有回血停止進針，開始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。這種技術是將蛋白質視為抗原，并利用抗體與之進行特異性結合的特性，來進行研究。

且研究表明HNRNPC通過m6A與RNA結合調控目標轉錄本的豐度和選擇性剪切[9].圖1m6A修飾的酶系統[10]m6A生物學功能越來越多的證據表明m6A修飾在哺乳動物中發揮重要的生物功能。例如，在轉錄水平上調控RNA的穩定性[11]、定位[12]、運輸、剪切[13]和翻譯[14]。ClaudioR.等發現依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會促進DGCR8識別和加工，從而促進microRNA的成熟[15]。此外，m6A識別蛋白HNRNPA2B1促進pri-miRNA加工成pre-miRNA[16]。另外，環狀RNA上m6A的修飾能促進環狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達調控中起著重要的作用，其調控機制的異常可能與人類疾病或相關。目前發現m6A可能會影響精子發育（ALKBH5，METTL3，Ythdc2）、發育（METTL3、FTO、ALKBH5）、免疫（METTL3）、UV誘導的DNA損傷反應（METTL3，FTO）、生成（YTHDF2）或轉移（METTL14）、干細胞更新（METTL14）、脂肪分化（FTO）、生物節律、細胞發育分化、細胞分裂及其它的一些生命過程。例如，ALKBH5敲除的雄性小鼠增加了mRNA中的m(6)A修飾，其特點是凋亡影響減數分裂中期的精子細胞，引起生育能力受損[7]。METTL3和METTL14增加弱精癥精子的m6A水平[18]，在生殖細胞中，METTL3的敲除嚴重抑制精子分化和減數分裂的發生。動物疾病模型：為人類健康保駕護航。云南科研技術服務

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動物模型在科研中有著普遍的應用。首先，它們可以幫助科研人員深入理解的共同性，即不同物種之間存在的共有理變化過程。通過對動物模型的研究，科研人員可以更清楚地了解的發展過程和機制，為人類的檢查提供理論依據。其次，動物模型還為新研發和苗測試提供了的平臺。在研發過程中，科研人員可以通過對動物模型進行處理，觀察其和副作用，為新的臨床試驗提供依據。而在苗測試中，動物模型則可以用來評估苗的性和安全性。此外，動物模型還為科研人員提供了研究人類的跨學科方法。例如，通過比較人類和動物模型的基因組學、蛋白質組學等數據，可以發現與發生相關的關鍵基因和蛋白質，從而為的和檢查提供新的思路。雖然動物模型在科研中發揮了巨大的作用，但也存在一些挑戰。首先，由于物種差異的存在，動物模型的表現與人類可能存在差異，因此需要謹慎使用。此外，動物模型的倫理問題也不容忽視，科研人員需要在符合倫理規定的前提下進行相關研究。盡管存在挑戰，動物模型的發展前景仍然值得期待。隨著科技的不斷進步，科研人員將能夠開發出更為精確、實用的動物模型。廣西模式科研技術服務購買