痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型【簡介】痙攣性腦癱指發育異常引起的運動和感覺功能落后，造成肢體肌張力增高、腱反射亢進等一系列綜合征。本實驗利用腦立體定位解剖圖譜,對大鼠的錐體束部位進行精確的立體定位,通過微量注射器對大腦錐體束所在部位注射無水乙醇造成錐體束壞死,的模擬了痙攣型腦癱的解剖學及病理改變,術后大鼠產生明顯的屈曲痙攣癥狀,且屈肌肌張力增高,癥狀和體持續時間較長,穩定性良好。從而建立一種可復制性良好且痙攣持續時間較長的穩定的大鼠痙攣型腦癱動物模型,為進一步深入的探究痙攣型腦癱的基礎研究和臨床診治打下基礎【目的】痙攣型腦性癱瘓(SCP)大鼠模型建立【動物】SPF級SD大鼠，雄性，周齡6~8W，體重：200~250g【方法】1、大鼠麻醉，顱頂脫毛備皮；2、大鼠腦定位儀固定大鼠，顱頂正中切口，長度約2cm開口暴露前囟及矢狀縫；3、縫線將皮膚左右分開固定，前囟后10mm、矢狀縫左側；4、微量注射器移至開孔處修正骨孔，注射器垂直向顱內插入，緩慢注射無水乙醇15ul，注射完移除注射器，棉球壓迫止血；5、縫合創口后維持25°體溫，等待蘇醒，觀察大鼠狀態。【觀察】術后3天模型大鼠攝食減少、右側肢體跛行、右前肢不負重、右前肢及右前爪屈曲痙攣明顯。隨著跨學科研究的深入開展，動物疾病模型將在未來發揮更為普遍的作用，成為生命科學、醫學等領域研究工具。云南疾病模型科研技術服務技術

是整體甲基化進程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為個被發現的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結合能力，進而調控pre-mRNA的剪切加工過程[3]。目前已發現FTO調節異常與肥胖、大腦畸形和生長遲緩相關，揭示m6A可能對這些疾病具有重要的調節功能[4-6]。ALKBH5是ALKB家族中被發現具有去甲基作用的另一個成員，以RNaseA敏感的方式與核小斑共定位，它可直接催化m6A-甲基化腺苷去除甲基而不同于FTO的氧化去甲基化[7].此外，ALKBH5和它的去甲基化活性影響新生mRNA合的成和剪切效率[7]，且ALKBH5敲除雄性小鼠表現出精子發生異常，這可能是精子發生相關基因表達改變的結果[7]。m6AmRNA修飾執行其功能主要通過兩個途徑：精細調控甲基化轉錄本的結構，以阻止或誘使蛋白-RNA相互作用；或被直接由m6A結合蛋白識別，誘發續反應。目前一類含有YTH功能結構域的蛋白被鑒定為m6A修飾的結合蛋白。其中YTHDF1,YTHDF2,YTHDF3，YTHDC1和YTHDC2己被證實是ｍ６Ａ的結合蛋白.YTHDF1主要影響ｍ６Ａ修飾基因的翻譯，YTHDF2主要影響ｍ６Ａ修飾基因的降解，而YTHDC1結合ｍ６Ａ修飾的基因影響其剪接。HNRNPC是一種豐富的核RNA結合蛋白，參與pre-mRNA的加工[8]。裸鼠科研技術服務分離動物實驗這些取樣細節，你有注意嗎？

m6A研究又有新手段了？趕緊來了解一下吧！欄目：研究動態發布時間：2019-08-14RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一,Cell上新發表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章......RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一，目前主要的研究思路包括差異表達的write，reader和eraser基因分析；m6A抗體檢測全轉錄組甲基化水平；分析m6A甲基化水平變化的靶基因和下游機制研究。而在7月25日的Cell上新發表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章，小編時間和大家分享一下。作者開發這一方法的前提是有研究報道了MazF能特異性的識別無修飾的ACA序列并發揮RNA酶活性在ACA之前剪切底物。但ACA序列的個A發生m6A甲基化之后將無法被MazF所識別，如圖一所示。圖1MazFRNA酶作用示意圖根據這一原理，作者將純化后的mRNA進行MazF酶處理，然后再對打斷的RNA進行逆轉建庫測序。對于無修飾的位點，ACA處被完全剪切，測序reads正好分布于該位點上下游而且比對至該處的上下游reads數是相同的.如圖2所示。而甲基化位點的reads會包含上下游的序列。作者開發了MAZTER-MINE軟件包專門進行分析（圖3）。

RNA各種可逆的化學修飾被認為是一種新的表觀遺傳調控方式。m6A是真核生物mRNA常見的化學修飾，在調控mRNA穩定性，剪切和翻譯方面具有重要的作用。作者使用轉錄組測序發現了METTL3（甲基轉移酶3），一種主要的RNAN6-腺苷-甲基轉移酶，在人肝細胞（HCC）和多種實體中高表達。在臨床上，METTL3的過度表達與肝細胞患者不良預有關。體外實驗證明敲除METTL3會抑制HCC細胞增殖，遷移及克隆形成。體內實驗證明敲除METTL3會明顯抑制HCC體內成瘤和肺轉移。另外，使用CRISPR/dCas9-VP64系統，內源性高表達METTL3會促進HCC細胞在體外和體內生長。通過轉錄組測序、m6A-Seq、MeRIP-PCR，作者確定了SOCS2（細胞因子信號2的抑制因子）作為METTL3介導的m6A修飾的下游靶基因。敲除METTL3表達會消除SOCS2mRNAm6A修飾并增強SOCS2mRNA表達。m6A介導的SOCS2mRNA降解是依賴于m6A“讀取器”蛋白YTHDF2。總之，METTL3在HCC大部分高表達中,并通過m6A-YTHDF2依賴機制抑制SOCS2表達從而促進HCC進展。因此，作者發現了在肝發生過程中表觀遺傳改變的一種新機制。圖4RNA甲基化轉移酶METLLT3在肝組織中高表達。可以普遍應用于生物醫學研究、藥物篩選、腫、瘤診斷等領域。

shRNA)蛋白檢測蛋白純化蛋白分析蛋白修飾細胞生物學檢測藥物篩選實驗動物臨床檢測試劑相關檢驗試劑抗體庫抗體抗體制備第二抗體試劑盒抗體相關抗體庫抗體抗體制備第二抗體試劑盒抗體相關技術服務庫整體實驗外包服務細胞生物學服務測序/分子生物學服務生物芯片服務蛋白相關服務新藥研發外包服務技術服務庫整體實驗外包服務分子生物學服務寡核苷酸合成細胞生物學服務干細胞技術服務微生物學服務免疫學服務蛋白相關服務生物芯片服務實驗動物服務新藥研發外包服務大型儀器測試與驗證服務儀器維修服務技術培訓服務其它服務活動專題CellSignalingTechnology學堂生物標志物檢測將如何推進抗藥物研發細胞焦亡信號通路關鍵蛋白和研究動態2018免疫與生物網絡研討會期精選課程Webinar直播企業學堂微芯片上的生化室已有244061人觀看輕松搞定疫苗的作用機制已有219615人觀看Medidata如何改善患者在臨床研究中的體驗已有214453人觀看安捷倫2017二代測序系列講座之2：靶標富集和文庫構建技術大觀Merck新型解決方案原位RNA表達檢測方案及基礎研究實例分析BIO-RAD學堂GE技術大咖秀CellSignalingTechnology學堂技術專題第十一屆中國生物產業大會暨第三屆“中國光谷”國際生命健康產業博覽會火熱。純干貨Western blot （WB）條帶灰度統計與GraphPad作圖.廣西動物科研技術服務實驗

干貨分享 | 避坑，微生物培養的污染因素及預防方法，少走彎路。云南疾病模型科研技術服務技術

且研究表明HNRNPC通過m6A與RNA結合調控目標轉錄本的豐度和選擇性剪切[9].圖1m6A修飾的酶系統[10]m6A生物學功能越來越多的證據表明m6A修飾在哺乳動物中發揮重要的生物功能。例如，在轉錄水平上調控RNA的穩定性[11]、定位[12]、運輸、剪切[13]和翻譯[14]。ClaudioR.等發現依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會促進DGCR8識別和加工，從而促進microRNA的成熟[15]。此外，m6A識別蛋白HNRNPA2B1促進pri-miRNA加工成pre-miRNA[16]。另外，環狀RNA上m6A的修飾能促進環狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達調控中起著重要的作用，其調控機制的異常可能與人類疾病或相關。目前發現m6A可能會影響精子發育（ALKBH5，METTL3，Ythdc2）、發育（METTL3、FTO、ALKBH5）、免疫（METTL3）、UV誘導的DNA損傷反應（METTL3，FTO）、生成（YTHDF2）或轉移（METTL14）、干細胞更新（METTL14）、脂肪分化（FTO）、生物節律、細胞發育分化、細胞分裂及其它的一些生命過程。例如，ALKBH5敲除的雄性小鼠增加了mRNA中的m(6)A修飾，其特點是凋亡影響減數分裂中期的精子細胞，引起生育能力受損[7]。METTL3和METTL14增加弱精癥精子的m6A水平[18]，在生殖細胞中，METTL3的敲除嚴重抑制精子分化和減數分裂的發生。云南疾病模型科研技術服務技術