本發明采用活塞式推進桿外加正壓式肝素帽設計，增強了瓶身的一體性，減少了污染的可能性，且通過注射器注水的方式可以自行控制纖維板和培養瓶底部的接觸程度，使得操作流程更可控。附圖說明圖1是本發明的整體結構示意圖。圖2是本發明的縱向剖面結構示意圖。圖中標記為：1-外接圓柱；2-正壓口；3-阻隔環；4-彈簧；5-連接桿；6-加樣口；7-爬片瓶頸；8-纖維板；9-瓶底；10-直角三角支架；11-活動圓盤；12-纖維圓盤；13-瓶身。具體實施方式下面結合附圖和具體實施例對本發明進行詳細說明。如圖1和2所示，一種一體式原代細胞爬片培養瓶，包括瓶身13，所述瓶身13的其中一側端部設有爬片瓶頸7和加樣口6，瓶身13的上端部設有外接圓柱，所述外接圓柱1的頂端封閉、下端與瓶身13連通，并且外接圓柱1內設有活動圓盤11和纖維圓盤12，所述活動圓盤11位于纖維圓盤12的上方，活動圓盤11的四周外壁與外接圓柱1的內壁可滑動接觸，并且在外接圓柱1內壁上設有用于限制活動圓盤11向上活動的阻隔環3，同時在外接圓柱1位于活動圓盤11上方的柱體上設有正壓口2，所述纖維圓盤12固定設置，并且在纖維圓盤12內可活動穿插有連接桿5，所述連接桿5上端與活動圓盤11固定連接。人臍動脈內皮細胞，Human Umbilical Artery Endothelial Cells。內蒙古裸鼠原代細胞構建

    充分去除組織表面的血漬和其它異物。2、將組織轉入另一無菌的培養皿，切去多余組織如脂肪或壞死組織，用無菌刀將組織切成1mm3小塊。3、用無菌彎頭鑷將組織塊轉入50ml的無菌離心管中，讓組織塊沉淀，吸去多余液體，加入10mlbuffera，充分混勻，300g離心5分鐘，棄上清，如此重復操作3次。4、用10mlbufferb重懸組織塊，將組織塊懸液轉移至25cm2無菌培養瓶中，放置co2培養箱中，37℃培養24小時。5用強力吹打使組織分散，將懸液移入15ml無菌離心管，500g離心5分鐘，棄上清。6、取10mlbufferc懸浮組織塊，置于37℃水浴中30分鐘，每10分鐘搖動一次，讓組織塊沉淀。7、取上清放入50ml離心管中，加入1mlbufferd,終止反應。8、重復步驟6、7兩次。9、將吸出全部上清進行離心，500g離心5分鐘，棄上清。10、取2mlbuffere懸浮細胞，用血球計數板或電子記數儀計數細胞，并檢測細胞活性。11、懸浮細胞用相應的原代細胞培養基稀釋，使每毫升培養基中含有1×106個細胞，接種培養瓶中，大約每平方厘米2×105個細胞。12、每隔2-4天更換一次培養基（以ph變化為標準），觀察細胞生長情況。內蒙古原代細胞分離臍帶是哺乳類連接胎兒和胎盤的管狀結構。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈。

    凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。[4]細胞培養具體步驟編輯一、細胞復蘇將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10mlDMEM培養基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM完全培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。二、細胞傳代細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱3min。加人1mlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10mlPBS（經高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。三、細胞凍存細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含，放入細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內。

    換液時間隔一般較短。原代細胞培養問題解答1、原代細胞與細胞系有什么區別？根據傳統定義，自組織收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經數次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內需掌握好細胞的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。但實際上，經過長時間、連續的傳代培養后，細胞系隨著代數的增加，細胞的基因型和表型都有可能發生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群，除非細胞經過了遺傳改造。2、倍增和代數有什么區別？倍增是培養物中細胞總數的翻倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過程的次數，傳代培養的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。3、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快，以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。人臍動脈內皮細胞分離自臍帶動脈，一般用于生理學和藥理學研究。

    [1]細胞培養營養條件1．培養基細胞培養基包含細胞生長所需的各種營養物質，包括碳水化合物、氨基酸、無機鹽、維生素等。針對不同細胞的營養需求，有多種合成培養基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。2．其他添加成分在各種合成培養基提供基礎營養物質之外，還需根據不同細胞和不同的培養目的添加其他成分，如血清、因子等。血清提供的是細胞外基質、生長因子和轉鐵蛋白等重要物質，常用的是胎牛血清。要根據不同的細胞和不同的研究目的決定添加血清的比例。10%～20%的血清能維持細胞較快的生長增殖速度，稱為生長培養液；為維持細胞緩慢生長或不死，添加2%～5%的血清即可，稱為維持培養液。但血清中也存在有害于細胞生長和繁殖的物質，如補體、免疫球蛋白和一些生長抑制因子；成分不明確，影響對結果的分析；不同動物、不同批次的血清活性差別較大，影響培養效果的穩定性。谷氨酰胺是細胞生長重要的氮源，在細胞生長代謝過程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。為防止污染，培養基中還需添加一定量的常用名稱、濃度及敏感性如下表。臍帶間充質干細胞是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細胞，它能分化成許多種組織細胞。江蘇血液原代細胞技術

多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長。內蒙古裸鼠原代細胞構建

    ⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，用75%酒精清潔臺面。（3）細胞污染的預防①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。②操作過程防止污染。③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細胞間。④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時對手套進行消毒。⑤進入細胞培養間后關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。⑦實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時不能對著工作區，以免造成不必要的污染。⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。⑨不要從敞開的容器口上方經過。內蒙古裸鼠原代細胞構建

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