熒光壽命成像:熒光壽命是熒光團在發射熒光光子返回基態之前保持其激發態的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結合:對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼,產生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關于熒光分子空間分布的信息和有關其生化狀態或納米環境的信息。有很多技術可以在顯微鏡環境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體(受體光漂白,FRET AB)或受體(敏化發射,FRET SE)熒光強度的技術。熒光壽命成像被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領域。佛山化學熒光壽命成像采購
熒光壽命成像可以運用在哪些地方?熒光壽命成像顯微技術已在生命科學領域中得到了普遍的應用。成像,擴散光學層析成像,熒光相關光譜等等。使用我們專有的多維時間相關單光子計數技術(TCSPC),我們的FLIM和TCSPC系統具有超高光子效率的特點。因此,科學家,醫生,研究人員和其他用戶能夠進行TCSPC FLIM顯微鏡檢查,多波長FLIM,同時FLIM和快速獲取FLIM。生命科學是我們熒光壽命成像顯微(FLIM)設備的主要應用領域。經常用于以下領域:分子影像學、代謝成像、FRET成像、同時進行NAD(P)H和pO2成像。上海顯微熒光壽命成像大概多少錢熒光壽命成像是什么樣的技術?
熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰:在數據處理上,由于曲線擬合迭代過程的需求,計算成本較其他成像方案更高。在成像原理上,熒光壽命受多種外界因素影響,這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等,很難對這些參數控制變量,使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外,與普通光學顯微技術類似,介質光散射影響成像信噪比及空間分辨率,成像深度受到限制。FLIM已經在系統裝置、熒光探針和數據處理算法等方面得到了較快的發展,這也使得熒光壽命成像FLIM在對細胞微環境成像和生物代謝監測發揮出不可替代的作用。
熒光壽命成像的優勢:通過熒光壽命來進行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進行參數調節。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。熒光壽命是熒光分子在激發態停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內在屬性和所處的微環境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復雜和耗時的工作,只有少數專業的科學家關注和使用該工具。傳統的多色成像實驗根據光譜差異來設計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強度擾動、染料的光漂白以及其他有礙熒光強度的因素的影響。
熒光壽命成像技術是怎么運作的?通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命??娠@示單指數或多指數熒光衰減。數值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數)。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,FLIM-FRET為內部參照—這一特點減少了基于強度測量FRET時的很多缺點。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達水平)具有普遍的不變性。使用基于強度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經歷FRET的基本假設。通常情況并非如此。熒光壽命成像能夠對不同種類或處于不同狀態的生物組織提供更好的對比度。深圳化學熒光壽命成像多少錢
熒光壽命成像顯微技術經常用于以下領域:分子影像學、代謝成像、FRET成像、同時進行NAD成像。佛山化學熒光壽命成像采購
熒光壽命成像的優勢是什么?熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優點;不需要考慮跳色的影響,從而免去了計算和去除跳色雜質信號的麻煩;去除跳色雜質的準確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設計和控制、以及跳色信號估算的算法,這些因素使得通過穩態光強度測量熒光壽命成像的精確度在很多時候受到質疑。穩態光強度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標記光漂白或是激發光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。熒光壽命成像可以定量的區分參與FRET和沒有參與FRET的分子數量,這樣深入的定量分析是穩態光強度方法做不到的。佛山化學熒光壽命成像采購
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