熒光壽命成像(FLI):這種技術相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環境而并非濃度的事實。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環境參數,通過熒光共振能量轉移(FRET)進行的蛋白質相互作用,并可以通過細胞和組織的自發熒光來測量其代謝狀態。分子環境參數可以通過因熒光淬滅或熒光團的構象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。廣州植物熒光壽命成像操作步驟
顯微熒光壽命成像應用:材料科學領域:寬禁帶半導體等體系的少子壽命mapping 測量;量子點等用作熒光壽命成像顯微鏡探針;鈣鈦礦電池/LED 薄膜的組分分析、缺陷檢測;銅銦鎵硒CIGS,銅鋅錫硫CZTS 薄膜太陽能電池的組分、缺陷檢測;鑭系上轉換納米顆粒;GaAs 或GaAsP 量子阱的載流子擴散研究;生命科學領域:細胞體自身熒光壽命分析;自身熒光相對熒光標記的有效區分;活細胞內水介質的PH 值測量;局部氧氣濃度測量;具有相同頻譜性質的不同熒光標記的區分;活細胞內鈣濃度測量;時間分辨共振能量轉移(FRET):納米級尺度上的遠差測量,環境敏感的FRET 探針定量測量;代謝成像:NAD(P)H 和FAD 胞質體的熒光壽命成像。深圳化學熒光壽命成像哪個品牌好熒光壽命顯微成像,可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導體領域具有重要的應用價值。
熒光壽命成像 (FLIM)通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數或多指數熒光衰減。數值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數)。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,FLIM-FRET為內部參照—這一特點減少了基于強度測量FRET時的很多缺點。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達水平)具有普遍的不變性。使用基于強度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經歷FRET的基本假設。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結合”組分給測量的FRET效率帶來了相當大的不確定性,使得無法在實驗之間進行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點。
時域法熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關單光子計數法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測法(time-gated detection)、條紋相機測量法(streak-FLIM)、頻閃技術等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術,同軸脈沖光源發出的脈沖光引起起始光電倍增管產生電信號,該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉換器(time-amplitude converter,TAC),時幅轉換器產生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外,同軸脈沖光源發出的脈沖光通過激發單色器后到達樣品池,樣品產生的熒光信號再經過發射單色器到達終止光電倍增管,由此產生的電信號經由恒分信號甄別器2到達時幅轉換器并使其停止工作。此時,時幅轉換器根據累積電壓輸出一個數字信號并在多通道分析儀(multi-channel analyzer)的相應時間通道計入一個信號,表明檢測到壽命為該時間的一個光子。經過幾十萬次的重復后,不同的時間通道累積下來的光子數目不相同。熒光壽命成像主要應用領域包括:用于樣品分離。
熒光壽命成像在生物醫學研究和臨床診斷應用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測量中,要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應用范圍.目前的一個研究方向是,發展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進行參數調節。上海顯微熒光壽命成像有哪些
熒光壽命成像不受光漂白的影響。廣州植物熒光壽命成像操作步驟
與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質的一種內在特有性質,不受熒光物質濃度、激發光強度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對蛋白互作進行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環境變化,更重要的是其測量數據準確性高、易重復。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環境進行檢測、對樣品組份進行分離等等。在傳統的熒光強度和熒光光譜兩個維度的基礎上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統的應用范圍。廣州植物熒光壽命成像操作步驟
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