熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢(shì)。通過(guò)熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布，較為直接和簡(jiǎn)便，但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性，或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時(shí)，依賴(lài)強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無(wú)法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同，熒光壽命成像FLIM適用于測(cè)量熒光分子環(huán)境的變化，或是測(cè)量分子的運(yùn)動(dòng)情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無(wú)關(guān)，且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響，可以精確測(cè)量熒光淬滅過(guò)程，對(duì)生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測(cè)量。熒光壽命成像可以提供有關(guān)電信號(hào)變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。上海單分子熒光壽命成像

熒光壽命成像或FLIM是基于熒光樣品中不同區(qū)域的熒光的指數(shù)衰減速率的差異。由τ決定熒光壽命成像的每個(gè)像素的強(qiáng)度，這使研究人員可以查看具有不同熒光衰減率的材料之間的對(duì)比度，還可以產(chǎn)生顯示其他衰減路徑變化的圖像。可以通過(guò)使用脈沖源在時(shí)域中確定熒光壽命。當(dāng)熒光物質(zhì)被超短脈沖激發(fā)時(shí)，時(shí)間分辨的熒光將呈指數(shù)衰減。時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（tcspc）通常被用作熒光壽命的測(cè)量方法，因?yàn)樗a(bǔ)償了在源強(qiáng)度和單光子的脈沖幅度的變化。更具體地說(shuō)，TCSPC由單個(gè)光子雪崩光電二極管（SPAD）記錄相對(duì)于激發(fā)激光脈沖的單個(gè)光子的壽命。重復(fù)記錄多個(gè)激光脈沖，并在記錄了足夠多的事件后，研究人員能夠建立所有這些記錄的時(shí)間點(diǎn)上事件數(shù)量的直方圖。然后，可以將該直方圖擬合到的指數(shù)壽命衰減函數(shù)的指數(shù)函數(shù)，并且可以相應(yīng)地提取壽命參數(shù)。動(dòng)物熒光壽命成像一般多少錢(qián)熒光壽命成像使用簡(jiǎn)單，方便快捷，不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。

典型的熒光壽命成像包括從感興趣區(qū)域（ROI）的共焦圖像中提取1-，2-或3-衰減時(shí)間。限制熒光團(tuán)的衰減速率可能是任意的，而且很復(fù)雜，因?yàn)樵诩?xì)胞環(huán)境中存在幾種衰減速率。對(duì)于相量圖，關(guān)于選擇哪種衰減模型以及評(píng)估擬合優(yōu)度的挑戰(zhàn)性決定已成為過(guò)去。在相量圖中，所有原始FLIM數(shù)據(jù)在向量空間中均表示為相位和幅度。圖像中的每個(gè)像素都轉(zhuǎn)換為相量圖中的一個(gè)點(diǎn)。單獨(dú)于其在圖像中的位置，具有相似衰減特征的像素在相量圖中形成群集。可以在此陣列中選擇不同的相量簇，并在標(biāo)注中反向注釋對(duì)應(yīng)的像素。

受光學(xué)衍射極限的限制，熒光顯微技術(shù)的空間分辨率只能達(dá)到200納米左右，難以滿(mǎn)足生命科學(xué)研究的需要。而對(duì)于熒光壽命成像來(lái)說(shuō)，其空間分辨率受衍射極限的影響尤為嚴(yán)重。熒光壽命成像是一個(gè)新興的研究領(lǐng)域，尋求具有高度原創(chuàng)性的技術(shù)原理與方案，并率先解決熒光壽命成像在生命科學(xué)應(yīng)用中存在的難題，具有重大的科學(xué)意義與應(yīng)用價(jià)值。一種熒光壽命成像方法，所述方法包括下述步驟：對(duì)標(biāo)記于樣品中的光開(kāi)關(guān)染料分子進(jìn)行稀疏激勵(lì)；激發(fā)樣品中被激勵(lì)的光開(kāi)關(guān)染料分子，收集被激發(fā)的光開(kāi)關(guān)染料分子所發(fā)射的光子并記錄光開(kāi)關(guān)染料分子的熒光圖像，對(duì)熒光圖像中的光開(kāi)關(guān)染料分子進(jìn)行質(zhì)心定位；對(duì)在質(zhì)心定位處接收到的光子進(jìn)行計(jì)數(shù)，確定被激發(fā)的光開(kāi)關(guān)染料分子的熒光壽命；結(jié)合得到的光開(kāi)關(guān)染料分子的質(zhì)心定位結(jié)果和熒光壽命，構(gòu)建熒光壽命圖像。熒光壽命成像技術(shù)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)。

熒光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué)，臨床熒光壽命領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。成像，擴(kuò)散光學(xué)層析成像，熒光相關(guān)光譜等等。使用我們專(zhuān)有的多維時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)技術(shù)（TCSPC），我們的FLIM和TCSPC系統(tǒng)具有超高光子效率的特點(diǎn)。因此，科學(xué)家，醫(yī)生，研究人員和其他用戶(hù)能夠進(jìn)行TCSPC FLIM顯微鏡檢查，多波長(zhǎng)FLIM，同時(shí)FLIM和快速獲取FLIM。生命科學(xué)是我們熒光壽命成像顯微（FLIM）設(shè)備的主要應(yīng)用領(lǐng)域。我們的技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域：分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時(shí)進(jìn)行NAD(P)H和pO2成像。熒光壽命成像不受染料濃度的影響；湖北開(kāi)放式熒光壽命成像原理

由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響，具有其他熒光成像技術(shù)無(wú)法代替的優(yōu)異性能。上海單分子熒光壽命成像

新技術(shù)和新概念的發(fā)展促進(jìn)了數(shù)據(jù)評(píng)估，意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍，可以媲美標(biāo)準(zhǔn)共聚焦成像，且操作簡(jiǎn)單。熒光過(guò)程提供了兩個(gè)用于成像的測(cè)量參數(shù)：強(qiáng)度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。可以通過(guò)觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來(lái)測(cè)量熒光染料的典型壽命。我們可以測(cè)量圖像中所有像素的典型壽命，并將這些數(shù)字記入數(shù)組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無(wú)關(guān)。無(wú)論樣品結(jié)構(gòu)只有零星熒光染料還是載滿(mǎn)熒光染料：壽命信號(hào)始終相同，并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此，熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒(méi)有改變。這是壽命測(cè)定的主要優(yōu)勢(shì)。上海單分子熒光壽命成像

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