熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合，熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發光強度和光漂白影響等優點。在過去的十年中，光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫學的迅速發展，共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。熒光壽命成像（FLIM）對細胞信號傳導及調控，蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。上海單分子熒光壽命成像研發

熒光壽命成像技術（Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy，FLIM）是一種在顯微尺度下展現熒光壽命空間分布的技術，由于其不受樣品濃度影響，具有其他熒光成像技術無法代替的優異性能，目前在生物醫學工程、光電半導體材料等領域是一種重要的表征測量手段。熒光和熒光壽命：分子包含多個單能態S0、S1、S2…和三重態T1…，每個能態都包含多個精細的能級。正常情況下，大部分電子處在*低能態即基態S0 的*低能級上，當分子被光束照射，會吸收光子能量，電子被激發到更高的能態S1 或S2 上，在S2 能態上的電子只能存在很短暫的時間，便會通過內轉換過程躍遷到S1 上，而S1 能態上的電子亦會在極短時間內躍遷到S1 的*低能級上，而這些電子會存在一段時間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態，這個過程會釋放一個光子，即熒光。此外，亦會有電子躍遷至三重態T1 上，再由T1 躍遷至基態，我們稱之為磷光。化學熒光壽命成像哪家好熒光壽命成像技術有兩種：時間域和頻率域。

熒光壽命是熒光基團在通過發射熒光光子返回基態之前在其激發態下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發態停時間不同，大多數生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經典方法為點對點的時間相關單光子計數（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應用于科學研究。隨著技術的發展，在顯微鏡視野內進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡單。因為每個物種都有特定的相量，所以可以在單個像素內解析多個分子物種。相量圖如何生成？當使用時間分辨單光子計數（TCSPC）系統獲取數據時，相量FLIM分布是從傅立葉變換中得出的（Digman等，2008）。圖像中的每個像素對應于相量圖中的一個點。

熒光壽命成像在生物醫學研究和臨床診斷應用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求，如在FRET測量中，要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減，多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段．目前，基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像，而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低，這些都限制了其應用范圍．目前的一個研究方向是，發展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術。熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。

熒光壽命成像可以提供熒光強度（光子數）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發（結合飛秒脈沖和共焦顯微鏡）可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術，無需解剖或專門制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實現深度解析測量。特別適用于新材料、光子學、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復合材料以及其相關的原理探究和設計優化。熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。因此我們可以獲取每個像素點的壽命信息，也可以獲知每一壽命所對應的圖像區域。熒光壽命成像可用于多種生物應用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、皮膚成像等。佛山紅外熒光壽命成像使用步驟

熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術。上海單分子熒光壽命成像研發

市場上熒光壽命的測量方式可分為時域法和頻域法，兩者在本質上是相通的，測量精度相近，頻域技術是時域法的傅里葉變換的延伸。時域和頻域技術在各種顯微壽命成像平臺中都有應用，時間相關單光子計數方法（TCSPC )是常見的時域技術，而新興的數字頻域技術（FastFLIM? )則取代了傳統的模擬頻域技術，憑借其獨恃的優勢成為應用廣的頻域技術。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術（Time-Correlated Single Photon Counting）實現。由于TCSPC系統，一個激光脈沖只采集一個光子信號，所以激光器的重復頻率決定了系統的數據采集速度。重頻越高，采集速度越快，數據信噪比越好。上海單分子熒光壽命成像研發

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