熒光壽命成像（Fluorescence Lifetime Imaging ，FLIM)）是一種重要的熒光顯微鏡技術，通常用于研究生物分子間相互作用、細胞中的信號事件或區分光譜重疊的熒光團。此外，FLIM 可以提供有關電信號變化、離子和氧含量、溫度、細胞或其環境中的 pH 值的定量信息。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優點：不受染料濃度的影響，無論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現一致的數據，這意味著更少的實驗數量和重復性更好的實驗結果。不受光漂白的影響，熒光發射時間不受激發光強度的影響，因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。熒光壽命成像系統是一種用于化學領域的分析儀器。珠海單分子熒光壽命成像哪里買
熒光壽命成像在生物醫學研究和臨床診斷應用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求，如在FRET測量中，要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減，多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段．目前，基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像，而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低，這些都限制了其應用范圍．目前的一個研究方向是，發展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術。深圳單分子熒光壽命成像哪家好不同熒光基團激發態停時間不同，大多數生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。
熒光壽命成像有幾點優勢：1.不需要考慮跳色的影響，從而免去了計算和去除跳色雜質信號的麻煩；去除跳色雜質的準確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設計和控制、以及跳色信號估算的算法，這些因素使得通過穩態光強度測量熒光壽命成像的精確度在很多時候受到質疑。2.穩態光強度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標記光漂白或是激發光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。3.熒光壽命成像可以定量的區分參與FRET和沒有參與FRET的分子數量，這樣深入的定量分析是穩態光強度方法做不到的。
熒光壽命(FLT)是熒光團在發射光子并返回基態之前花費在激發態的時間。根據熒光基團的不同，FLT可以從皮秒到數百納秒不等。熒光團群的壽命是指經熒光或非輻射過程的能量損失后，激發態分子數量以指數方式衰減到原始數量的N / e（36.8％）的時間。熒光壽命是熒光團的固有屬性。FLT不依賴于熒光團濃度、樣品吸收、樣品厚度、測量方法、熒光強度、光漂白和/或激發強度。它受外部因素影響，如溫度、極性和熒光淬滅劑的存在。熒光壽命對依賴于熒光團結構的內部因素敏感。熒光壽命成像能夠靈敏地反應熒光基團生化特性以及周圍微環境的變化情況。
熒光壽命成像或FLIM是基于熒光樣品中不同區域的熒光的指數衰減速率的差異。由τ決定熒光壽命成像的每個像素的強度，這使研究人員可以查看具有不同熒光衰減率的材料之間的對比度，還可以產生顯示其他衰減路徑變化的圖像。可以通過使用脈沖源在時域中確定熒光壽命。當熒光物質被超短脈沖激發時，時間分辨的熒光將呈指數衰減。時間相關單光子計數（tcspc）通常被用作熒光壽命的測量方法，因為它補償了在源強度和單光子的脈沖幅度的變化。更具體地說，TCSPC由單個光子雪崩光電二極管（SPAD）記錄相對于激發激光脈沖的單個光子的壽命。重復記錄多個激光脈沖，并在記錄了足夠多的事件后，研究人員能夠建立所有這些記錄的時間點上事件數量的直方圖。然后，可以將該直方圖擬合到的指數壽命衰減函數的指數函數，并且可以相應地提取壽命參數。熒光壽命成像可用于多種生物應用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、皮膚成像等。深圳單分子熒光壽命成像哪家好
市場上熒光壽命的測量方式可分為時域法和頻域法。珠海單分子熒光壽命成像哪里買
熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。時間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品（比色皿、細胞或組織），然后隨時間測量發射強度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量，其中時間相關單光子計數（TCSPC）可實現簡單的數據收集和增強的定量光子計數。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調制。在該方法中，發射發生在與入射光相同的頻率處，并且隨著激發光兼有相位延遲和振幅的變化（解調）。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測量可用于沒有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉移轉導機制的任何親和力或免疫測定。珠海單分子熒光壽命成像哪里買
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