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重慶顯微熒光壽命成像原理

來源: 發布時間:2022-05-22

熒光壽命成像技術有兩種:時間域和頻率域。(1)時域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM),理由一是激光是脈沖的,二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。(2)頻域FLIM:需要一個相位調制的光源,有用LED調制的。熒光壽命成像FLIM的應用:1)細胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對熒光標記的有效區分;3)具有相同頻譜性質的不同熒光標記的區分;4)活細胞內水介質的PH值測量;5)局部氧氣濃度測量;6)活細胞內鈣濃度測量;7)時間分辨Forster共振能量轉移(FRET):納米級尺度上的遠程測量,環境敏感的FRET探針定量測量。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調控,蛋白間的相互作用等生物研究發揮著很大作用。重慶顯微熒光壽命成像原理

典型的熒光壽命成像包括從感興趣區域(ROI)的共焦圖像中提取1-,2-或3-衰減時間。限制熒光團的衰減速率可能是任意的,而且很復雜,因為在細胞環境中存在幾種衰減速率。對于相量圖,關于選擇哪種衰減模型以及評估擬合優度的挑戰性決定已成為過去。在相量圖中,所有原始FLIM數據在向量空間中均表示為相位和幅度。圖像中的每個像素都轉換為相量圖中的一個點。單獨于其在圖像中的位置,具有相似衰減特征的像素在相量圖中形成群集。可以在此陣列中選擇不同的相量簇,并在標注中反向注釋對應的像素。重慶顯微熒光壽命成像原理由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響,具有其他熒光成像技術無法代替的優異性能。

熒光壽命成像在生物醫學研究和臨床診斷應用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測量中,要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應用范圍.目前的一個研究方向是,發展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術。

熒光壽命成像可以應用到個性化化療:要針對患者所患的特殊病癥,找到較有效的抗病藥物至關重要。但是,病細胞對不同類型藥物的反應并不是完全可預測的。因此,進行活檢,將細胞培養并用不同的藥物處理。同時,它們被FLIM重復成像。熒光壽命表明治理后細胞代謝狀態的早期改變。因此,通過這些測量,只需幾天即可確定較有效的藥物。熒光壽命成像將時域多指數衰減分析與相量圖相結合。時域中熒光衰減的測量需要短的激發脈沖和快速的檢測電路。樣品中的每個點都被依次激勵。使用時域方法,壽命是從對衰減數據的指數擬合得出的。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術結合起來,實現人體三維熒光壽命成像,實現人體三維功能成像奠定基礎。

熒光壽命是熒光分子在激發態停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內在屬性和所處的微環境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復雜和耗時的工作,只有少數專業的科學家關注和使用該工具。傳統的多色成像實驗根據光譜差異來設計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。通過熒光壽命來進行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進行參數調節。利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現可以實時監控發光納米顆粒在活細胞內的穩定性。重慶植物熒光壽命成像供應

熒光壽命(FLT)是熒光團在發射光子并返回基態之前花費在激發態的時間。重慶顯微熒光壽命成像原理

熒光壽命成像顯微技術已在生命科學,臨床熒光壽命領域中得到了普遍的應用。成像,擴散光學層析成像,熒光相關光譜等等。使用我們專有的多維時間相關單光子計數技術(TCSPC),我們的FLIM和TCSPC系統具有超高光子效率的特點。因此,科學家,醫生,研究人員和其他用戶能夠進行TCSPC FLIM顯微鏡檢查,多波長FLIM,同時FLIM和快速獲取FLIM。生命科學是我們熒光壽命成像顯微(FLIM)設備的主要應用領域。我們的技術經常用于以下領域:分子影像學、代謝成像、FRET成像、同時進行NAD(P)H和pO2成像。重慶顯微熒光壽命成像原理

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